病毒清除验证

病毒清除验证是药物开发中最为关键的步骤之一，为新药临床研究审批（IND）和生物制品上市申请（BLA）提供关键性的支持。这种验证的目的是确保病毒清除工艺的有效性，即该工艺能够有效地消除病毒。病毒清除验证有助于确定病毒清除工艺的有效性，以及病毒清除工艺是否能够有效地阻止病毒的传播。此外，验证还可以确定病毒清除工艺的有效时间，以及清除病毒所需的时间，还有效比例和所需比例。

动物源性医疗器械，根据《动物源性医疗器械注册技术审查指导原则》(2017年修订版)，申请动物源性医疗器械的注册申报，所提交的研究资料中需包含对生产过程中灭活和去除病毒和/或传染性因子工艺过程的描述及有效性验证数据或相关资料。

1）选择指示病毒：选择1-2种具代表性的DNA/RNA病毒，如腺病毒、肠道病毒等。
2）制备病毒悬浮液：调整病毒悬浮液浓度为107-108 TCID50/ml。
3）接种指示病毒：取医疗器械样本，接种100μl病毒悬浮液，室温条件下吸附30 min。
4）工艺处理：进行病毒灭活/去除工艺处理，包括实验组和病毒接种的空白对照组。
5）病毒含量测试：使用细胞培养法、PCR法检测处理前后样本中病毒含量。
6）加速老化：37 ℃条件下加速老化处理样本，样本期末进行病毒含量复测。
7）重复验证：调整工艺参数，重复验证测试，最终确定优化方案。
8）统计学分析：使用t检验等方法分析比较不同组别之间结果。

1）选择指示病毒,调制不同病毒载量的原液(例如107、106、105 TCID50/ml)。
2）设置多个时间梯度点(例如5min、10min、15min...)，在每个时间点取样。
3）在上述不同病毒载量和不同时间梯度取样点，依次进行病毒灭活处理。
4）利用细胞培养法定量检测每个样本病毒的残余含量。
5）将各时间点的病毒残余量绘制曲线，反映不同处理时间下的病毒减少趋势。如果曲线呈指数下降，则表明该灭活方法符合一阶灭活动力学规律。
6）通过曲线计算D值，即减少90%病毒需的处理时间。D值可用于评估灭活效率。
7）最后，确定Z值，即满足安全清除病毒的最大处理时间或次数。

YY/T 0771.3-2009/ISO 22442-3:2007 动物源医疗器械 第3部分：病毒和传播性海绵状脑病（TSE）因子去除与灭活的确认
YY 0970-2023 医疗保健产品灭菌 一次性使用动物源性医疗器械的液体化学灭菌剂  医疗器械灭菌过程的特征、开发、确认和常规控制的要求
《血液制品去除/灭活病毒技术方法及验证指导原则》（国药监注〔2002〕160号）
《动物源性医疗器械注册技术审查指导原则》(2017年修订版)