化妆品防腐挑战试验就是用来测定防腐剂有效抗菌的最低浓度，是用来决定化妆品配方中防腐剂的用量。无论是化妆品新配方的开发或现有的产品，以及新防腐剂的开发使用，均应作化妆品防腐挑战试验。

    化妆品为什么要添加防腐剂？

    所有的化妆品在生产和消费者使用过程中都面临着受到微生物污染的可能。大多数化妆品的制造原材料不是无菌的，但生产过程中没有采用无菌程序，没有灭菌过程，而且常常装在多次使用过的包装容器内，这就可能造成微生物的一次污染。

    二次污染是很难避免的，只能从加强防腐能力和减少细菌入侵着手，如选择合适的防腐体系、封闭良好的包装。产品的微生物污染不仅影响产品的功能和稳定性，而且最重要的是影响使用时的安全性，使用污染了的产品会给消费者造成健康威胁，因此在化妆品中常添加不同种类的防腐剂来防止微生物的大量繁殖，化妆品中防腐剂的存在减少了微生物存在的几率。

    为什么要做化妆品防腐挑战试验？

    在《化妆品安全技术规范》2015版中的规定，化妆品准用的防腐剂有51项，，规范中包括了各项准用防腐剂的中英文名称及INCI（国际化妆品原料）名称、最大允许使用浓度、允许使用范围及限制条件、标签上需要标注的使用条件和注意事项等。因此测防腐剂组分是化妆品检测的一项常规检测项目。

    化妆品防腐挑战试验检测方法

    CTFA法

    CIFA法用微生物包括：G+球菌如金黄色葡萄球菌；G-杆菌如大肠杆菌、铜绿假单胞菌；霉菌如黑曲霉、白色念珠菌。另外需氧产芽孢菌如蜡芽孢杆菌和枯草芽孢杆兰等可选用。

    CIFA使用的细兰培养基包括NA、TSA（水解大豆琼开培养基）、EA（琼脂培养基）。适宜于真兰生长的培养包括PDA（马铃薯琼脂培养基）或MA（琼脂培养基）。

    当菌体生长好后，可将细菌或酵母菌于5℃下斜面保存，霉菌可在室温下斜面保存。在准备接种物时，可以用肉汤或琼培养基培养细菌和酵母菌，收获的菌体用于微生物检验。

    一般来讲细菌的培养温度为35-37℃，真菌采用23-28℃培养。CTFA推荐混合测试的样品分别于0、1、23天（仅用于眼部的化妆品）、7、14和28天观察微生物的生长情况，有部分检验可能多于28天。

    有些产品还进行重复性的防腐试验来估计防腐剂在产中的适应性，用某一特定的微生物防腐试验可以得出使防腐系统失去效力所需的检验次数。

    USP法

    USP所用的微生物包括：金黄色葡萄球菌（ATcC6538）、大肠杆菌（ATCC8739）、钢绿假单胞菌（ATC9027）、白色念珠菌（ATCC10231）、黑曲霉（ ATCC6404）。

    USP采用的培养基是SCDA（大豆酪蛋白消化性琼脂培养），因为它可以使微生物旺盛地生长。故USP方法建议用此培养基来活化菌种。将保存的菌种在固体培养基上接种。

    根据这种方法，一种有效的防腐体系可以在14天后将细菌生存数减至初始浓度的0.1%，酵母和霉菌生存水平可能会更低。在试验后期阶段，必须低于或维持这些既定的水平。

    评价标准

    USP认为如果产品能做到以下几个方面就说明防腐剂系统有效：

    1. 在14天内存活菌数达到初始菌数的0.1%；

    2. 酵母菌和霉菌没有菌丝生长；

    3. 在28天保存试验中所有测试的微生物都保持或低于所设计的微生物水平。

    CTFA的评价标准认为如果产品能做到以下几个方面，就说明防腐剂系统有效：

    1. 在测试样品保存7天内细菌营养细胞应减少99.9%以上，并在试验期间继续减少；

    2. 酵母兰和曹应减少90%以上，并在试验期间继续减；

    3. 在整个试验期间可抑制芽孢的萌发。